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關于辣根過氧化物酶
源葉生物 / 2020-11-03

 一、簡介

辣根過氧化物酶,英文名Horseradish peroxidase,簡稱HRP,酶學編號EC1.11.1.7;是來源于辣根的一組具有一定酶活活性的同工酶,其中辣根過氧化物酶同工酶CHRP C)含量最高,在辣根的根部含量最為豐富。

 

 

二、結構

辣根過氧化物酶主要由糖蛋白(酶蛋白)和鐵(III)原卟啉IX(輔基)組成。糖蛋白中糖含量一般是18~22%。由于辣根過氧化物酶的酶蛋白和輔基分別在紫外波長275nm403nm下有最大吸收峰,分離得到的HRP都有一個OD403nm/OD275nm的比值RZ(德文Reinheit Zahl)。RZ值的大小表示了酶的純度,純度較高的HRPRZ值一般在3.0以上,RZ值越小,酶純度越低。源葉生物根據RZ值的不同,分別有以下幾款對應的產品:

貨號S10062  過氧化物酶(辣根) RZ3,酶活≥300u/mg;

 

 

貨號S10063  過氧化物酶(辣根) RZ2.5,酶活≥250u/mg;

 

 

貨號S10064  過氧化物酶(辣根) RZ1.5,酶活≥150u/mg;

 

 

HRP是一組同工酶,由于HRP C含量最高,對HRP C結構研究的也最為詳細。HRP C是一組單亞基糖蛋白,包含308個氨基酸殘基和8個糖鏈,每分子HRP C中有2分子Ca 2+ 、1分子(III)原卟啉IX輔基和4對二硫鍵,相對分子質量約為44 000。辣根過氧化物酶的作用機制,酶學特性,等電點等都與其結構息息相關。

三、酶的作用機制和酶學特性

HRP可以催化底物過氧化氫(H2O2)和供氫體(DH2)生成自由基和水,

 

 

供氫體有很多,如芳香族化合物,酚類,吲哚,胺類和磺酸鹽類等。在實際應用中,供氫體DH2多選擇溶液為無色的物質,通過反應生成有色物質.D,從而通過對反應后溶液顏色深淺的測定,來得到需要的數值。常用的供氫體DH2TMB(源葉貨號:S19126,ABTS(源葉貨號:S19198和焦性沒食子酸(源葉貨號:S30154。

由于供氫體多種多樣,針對不同的供氫體,HRP反應的最適pH都不太一樣,但多數是在5.0左右,反應的溫度一般就是常溫25℃左右。

三、應用

由于HRP性質穩定,天然來源豐富,且分子量小,容易制得活性較高的純酶,所以應用較為廣泛。

    1. HRP是目前在ELISA中應用最為廣泛的標記用酶之一,主要是因為其容易制得,價格相對較低,且性質穩定,耐熱和有機溶劑,與抗原或抗體偶聯后,活性損失很小。

2. HRP也常用與污水處理。工業廢水中含有大量的苯酚,雙酚A等分類和芳香胺類化合物,等環境污染較大,HRP可以將這些污染物作為底物,氧化成自由基,自由基在聚集成沉淀聚合物,從而大大降低對環境的污染。

3. HRP近幾年來被研究用作食品添加劑。由于HRP本身無毒無害,反應條件溫度,反應易控制,近年來被研究用于食品的保鮮,解毒和檢測等領域。

4. 檢測領域:HRP可以與葡萄糖氧化酶(源葉貨號S10020聯用,用以檢測葡萄糖含量。

 

上海源葉生物科技有限公司

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